Immunblot

Beim Immunblot werden Antigene auf Membranen als Festphase eingesetzt, um spezifische Antikörper mithilfe einer enzymatischen Farbreaktion in Patientenproben nachzuweisen. Die Durchführung erfolgt manuell, teil- oder vollautomatisiert. Enthält eine Probe spezifische Antikörper, binden diese an die membrangebundenen Antigene. In einem weiteren Schritt wird ein alkalische-Phosphatase(AP)-markierter Antikörper (Konjugat) hinzugegeben, der wiederum an die spezifischen Antikörper bindet. Die alkalische Phosphatase katalysiert mit dem anschließend hinzugegebenen Nitroblautetrazoliumchlorid/5-Brom-4-chlor-3-indolylphosphat (NBT/BCIP) eine Farbreaktion. Sind spezifische Antikörper in der Patientenprobe vorhanden, erscheint eine dunkle Linie an der jeweiligen Antigenposition. Die Intensität der entstehenden Färbung ist dabei proportional zur Antikörperkonzentration in der Probe.

EUROLINE

EUROLINE sind Multiparameter-Linienblots und ermöglichen die Erstellung umfangreicher kombinierter Antikörperprofile auf einem Teststreifen. Als antigenhaltige Festphase werden Membranstreifen mit mehreren aufgereinigten, biochemisch charakterisierten Antigenen oder Antigenextrakten verwendet, die als dünne parallele Linien aufgetragen sind. Die Membranen sind als Chips an genau definierten Positionen auf Kunststofffolien fixiert. Auf den Membranstreifen befinden sich keine überflüssigen Proteine, die zu unspezifisch positiven Resultaten führen könnten. Auf jedem EUROLINE-Teststreifen zeigt eine Kontrollbande an, ob die einzelnen Inkubationsschritte korrekt durchgeführt wurden. Die Auswertung erfolgt vollautomatisch mit der EUROLineScan-Software.

Westernblot und EUROLINE-WB

Der Westernblot ist die Methode der Wahl, wenn positive Befunde aus einem Suchtest (indirekte Immunfluoreszenz oder ELISA) bestätigt bzw. differenziert werden sollen. Als antigenhaltige Festphase werden Blotstreifen verwendet, die elektrophoretisch nach Molekularmassen aufgetrennte Antigenextrakte enthalten.

EUROLINE-WB sind eine Kombination aus Westernblot und EUROLINE: Die Westernblot-Streifen werden zusätzlich mit hochaufgereinigten nativen oder rekombinanten Antigenen in Form von Membranchips versehen. Die korrekte Durchführung der einzelnen Inkubationsschritte wird jeweils durch die Anfärbung der Kontrollbande am unteren Ende jedes Streifens angezeigt. Die Auswertung erfolgt vollautomatisch mit der EUROLineScan-Software.

EUROAssay

EUROAssays sind Multiparameter-Linienblots, die als BIOCHIPs an Objektträgern fixiert sind und mittels TITERPLANE-Technik abgearbeitet werden. Auf diese Weise können mit einem Objektträger mehrere Patientenseren gleichzeitig nebeneinander untersucht werden. Bereits während des Waschvorgangs nach der Probeninkubation können die Reagenzien für den nächsten Inkubationsschritt auf Reagenzträger pipettiert werden, sodass sich ein einfacher und zeitsparender Workflow ergibt.